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色谱分离技术的常用方法
点击次数:1111 发布时间:2016-11-16
   色谱分离技术是基于不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数,在采用流动相洗脱过程中呈现不同保留时间,从而实现分离。传统色谱分离技术采用固定的色谱塔进行,先进入一定量物料,然后采用洗脱剂不断洗脱,在同一出口在不同时间段就可接到不同的产品组分,此过程费时费力。经过分析并加以改进,我们把固定相的树脂做成可以连续流动的系统,利用物质与固定相的相对运动速度不同实现分离。下面就由小编为大家具体介绍色谱分离技术的常用方法,以作为参考希望能够帮到家。
  目前连续色谱分离技术已经实现成熟的工业化,除了实际的移动床可以实现以外,还有另一种模拟移动床可以运用,其主要原理就是采用一个电磁阀组模拟移动床的实际切换树脂柱的效果,即树脂柱不动,而进出料口通过程序控制阀门,使进料和出料到相应的树脂柱时打开或关闭。
  1、凝胶过滤又叫分子筛色谱,其原因是凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部,而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
  2、离子交换色谱是在以离子交换剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行,或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
  3、吸附柱色谱分离是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种色谱方法。薄层色谱是以涂布于薄板或涤纶片等载体上的基质为固定相,以液体为流动相的一种色谱方法。这种色谱方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层,然后按纸色谱操作进行展层。
  聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。色谱时,展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程,就能导致分离物质达到分离目的。
  4、亲和色谱是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力,将某种配体连接在载体上作为固定相,而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种色谱技术。亲和色谱是分离生物大分子zui为有效的色谱技术,分辨率很高。
  上面介绍的亲和色谱法也是特异性配体亲和色谱法。另外还有通用性配体亲和色谱法。这两种亲和色谱法相比,前者的配体一般为复杂的生命大分子物质,它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质,它成本低廉、具有较高的吸附容量,通过改善吸附和脱附条件可提高色谱的分辨率。
  5、聚焦色谱也是一种柱色谱。因此,它和另外的色谱一样,照例具有流动相,其流动相为多缓冲剂,固定相为多缓冲交换剂。聚焦色谱分离原理可以尝试从PH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。不同蛋白质具有不同的等电点,它们在被色谱分离技术的常用方法离子交换剂结合以前,移动之距离是不同的,洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

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